มีสอบแลปหาความเข้มข้นโปรตีนค่ะ อจ.ให้แก้ตัวกันสอบเพราะครั้งที่แล้วค่า abs พุ่งไป 2.5 ทุกความเข้มข้น
อันนี้มีทั้งหมด 9 หลอด (tube + unknown) โดยหนึ่งคือ blank ไม่มีโปรตีน
และสุดท้ายคือ หลอด 9 ไม่มีน้ำ ทุกหลอดมีปริมาณ "5.5 ml"
อจ.ให้ glutamate มาทีนี้เราต้องกะความเข้มข้นใส่น้ำ เอาเองเราก็เลยกะๆเอาใส่0.5 g glutamate ใน 50 ml (500mg/ml)
ใส่ 2% ninhydrin ที่อจเตรียมไว้อยู่แล้วไป 1 ml ส่วน 0.2 acetate buffer (pH 5.5) ก็ใส่ไป tube ละ 0.5 ml
ส่วน glutamate stock ก็ใส่ ไปตั้งแต่ 0-4ml ลดลั่นกันมา สลับกับน้ำกลั่น 4- 0ml
ตอนแรกทุกหลอดก็เรียงสีน้ำเงินตามความเข้มข้นสวยดี จากน้ำเงินจางสุดไปมากสุด แต่พอเอาไปต้ม 5-10นาที กลายเป็นทุกหลอดเข้มปิ๊ดปี๋ (ยกเว้น หลอด1) เพราะเอาเข้าเครื่อง uv-vis สเปคโทร ตรวจ abs ก็พุ่งไป 2.5 ทุกตัว ทีนี้เลยอยากจะถามว่า ต้องปรับปริมาณสารอะไรยังไงคะ?
1. ปรับปริมาณ glutamate อัตราส่วนเท่าไหร่? 0.05 g ได้ไหม?
2. unknown stock solution หรือก็คือ tube 10นั้นแหละ เห็นเพื่อนบอกไม่ต้องใส่น้ำแต่ใส่ ninhydrin กับbufferปกติจริงหรือเปล่าคะ?
3. ถ้าสีเรียงสวยแล้วไม่ต้องต้ม แล้วเอาเข้า uv vis สเปคโทรเลย มันได้มั้ยคะ?
4. สมมุติว่าเราอยากได้ค่าความเข้มข้นของ unknown stock ตอนแรก หลังจากพลอต calibration curve สมมุติได้ค่ามาปน y = 0.78 x - 0.2334 (มั่วๆค่ะ) ก็ใส่ abs unknown มา จะได้ความเข้มข้นของ unknown protein stock ที่แบ่งออกมา สมมุติ ในหลอดนั้น ใส่ unknown protein stock 4 ml + ninhydrin 1 ml + buffer 0.5 ml ใช้ C1V1 = C2V2 เพื่อหาความเข้มข้นเริ่มแรกมั้ยคะ
สมมุติ x = 10 mg/ml
มันจะได้ (4 ml)(10 mg/ml) = (C2)(5.5 ml) อย่างงี้หรือเปล่าคะ?
5. หรือเตรียมสารยังไงให้ใช้หลอดน้อยที่สุดคะแนะนำหน่อย
ต้องใส่ glutamate เท่าไหร่? หรือเตรียมสารอย่างอื่นยังไงให้ absไม่พุ่งไปถึง2.5
อันนี้มีทั้งหมด 9 หลอด (tube + unknown) โดยหนึ่งคือ blank ไม่มีโปรตีน
และสุดท้ายคือ หลอด 9 ไม่มีน้ำ ทุกหลอดมีปริมาณ "5.5 ml"
อจ.ให้ glutamate มาทีนี้เราต้องกะความเข้มข้นใส่น้ำ เอาเองเราก็เลยกะๆเอาใส่0.5 g glutamate ใน 50 ml (500mg/ml)
ใส่ 2% ninhydrin ที่อจเตรียมไว้อยู่แล้วไป 1 ml ส่วน 0.2 acetate buffer (pH 5.5) ก็ใส่ไป tube ละ 0.5 ml
ส่วน glutamate stock ก็ใส่ ไปตั้งแต่ 0-4ml ลดลั่นกันมา สลับกับน้ำกลั่น 4- 0ml
ตอนแรกทุกหลอดก็เรียงสีน้ำเงินตามความเข้มข้นสวยดี จากน้ำเงินจางสุดไปมากสุด แต่พอเอาไปต้ม 5-10นาที กลายเป็นทุกหลอดเข้มปิ๊ดปี๋ (ยกเว้น หลอด1) เพราะเอาเข้าเครื่อง uv-vis สเปคโทร ตรวจ abs ก็พุ่งไป 2.5 ทุกตัว ทีนี้เลยอยากจะถามว่า ต้องปรับปริมาณสารอะไรยังไงคะ?
1. ปรับปริมาณ glutamate อัตราส่วนเท่าไหร่? 0.05 g ได้ไหม?
2. unknown stock solution หรือก็คือ tube 10นั้นแหละ เห็นเพื่อนบอกไม่ต้องใส่น้ำแต่ใส่ ninhydrin กับbufferปกติจริงหรือเปล่าคะ?
3. ถ้าสีเรียงสวยแล้วไม่ต้องต้ม แล้วเอาเข้า uv vis สเปคโทรเลย มันได้มั้ยคะ?
4. สมมุติว่าเราอยากได้ค่าความเข้มข้นของ unknown stock ตอนแรก หลังจากพลอต calibration curve สมมุติได้ค่ามาปน y = 0.78 x - 0.2334 (มั่วๆค่ะ) ก็ใส่ abs unknown มา จะได้ความเข้มข้นของ unknown protein stock ที่แบ่งออกมา สมมุติ ในหลอดนั้น ใส่ unknown protein stock 4 ml + ninhydrin 1 ml + buffer 0.5 ml ใช้ C1V1 = C2V2 เพื่อหาความเข้มข้นเริ่มแรกมั้ยคะ
สมมุติ x = 10 mg/ml
มันจะได้ (4 ml)(10 mg/ml) = (C2)(5.5 ml) อย่างงี้หรือเปล่าคะ?
5. หรือเตรียมสารยังไงให้ใช้หลอดน้อยที่สุดคะแนะนำหน่อย