คำตอบที่ได้รับเลือกจากเจ้าของกระทู้
ความคิดเห็นที่ 1
กรองแบบใช้ป็มสุญญากาศจะเร็วกว่าครับ แต่อาจจะไม่ดีสำหรับเม็ดเจลนัก ปกติผมจะใช้วิธีตั้งให้ตกตะกอนแล้วค่อย ๆ ดูด้านบนออก แล้วก็ทำซ้ำ ๆ หลาย ๆ รอบน่ะครับ กรณีคุณเปลี่ยนจากบัฟเฟ่อร์ไปเป็นเบสจริง ๆ ก็ไม่ซีเรียสอะไรมาก แค่ตั้งให้ตกตะกอนแล้วดูบัฟเฟ่อร์ออก แล้วเติมน้ำกลั่น ตั้งไว้ แล้วดูดน้ำกลั่นออก แล้วเติมเบสได้เลย เพราะปกติเบสน่าจะใช้ที่ความเข้มข้น 1M ในการล้างครั้งแล้ว แล้วอาจจะใช้ที่ 0.1M ในการล้างครั้งที่สอง ส่วนเอทานอลจริง ๆ ไม่จำเป็นต้องใช้ก็ได้นะครับ ตอนที่เราเติมเบสเข้าไปแล้ว เราต้องล้างเบสออกให้ดีที่สุด ปกติก็ต้องเติมน้ำกลั่นลงไปแล้วเปลี่ยนใหม่จนกว่าจะวัด pH ของน้ำกลั่นให้ 7 น่ะครับ จากนั้นค่อยแพ็คแล้วก็ equilibrate ด้วยบัฟเฟ่อร์จนกว่าจะได้ pH ตามที่ควรจะเป็น
แสดงความคิดเห็น
ของถามเรื่องการล้างเม็ดเจล Superdex หน่อยครับ
แล้วใช้ไปการแยกสารไม่ค่อยดี ทำ purify สี่ครั้ง หน้าตา fraction ที่ออกมาไม่เหมือนกันเลย
แถม flow rate ก็ใช้ได้ไม่เกิน 0.3 ml/min ล้างด้วยเบสก็แล้ว ก็ยังเป็นแบบเดิม
ก็เลยปรึกษาอาจารย์ แล้วคิดว่าลองเอาเม็ดเจลมาล้างแล้วแพคใหม่ดู
ทีนี้ผมได้ทำการกระทุ้งเม็ดเจลออกมาจากคอลัมน์หมดแล้ว แล้วล้างโดยการแช่ในบัฟเฟอร์อยู่
แล้วมีความคิดอยากจะล้างด้วยเบส และเอทานอลซ้ำก่อนแพ็คใหม่
แต่สงสัยว่าถ้าเราจะเอาตัวบัพเฟอร์กับเจลให้แยกกันเพื่อเปลี่ยนเป็นเบสหรือเอทานอลต้องทำยังไงหรอครับ
กรองเอา หรือต้องปั่นแยกตะกอน หรือต้องตั้งให้มันตกตะกอนแล้วค่อยๆดูสารละลายทิ้ง แล้วเติมอันใหม่ลงไป
รบกวนผู้เชี่ยวชาญช่วยแนะนำทีครับ
เพราะเพื่อนๆที่เคยทำมีแต่เอาออกจากคอลัมน์มาล้างๆในบัฟเฟอร์ แล้วแพคใหม่เลยไม่ได้เปลี่ยนบัฟเฟอร์